ELISA的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應(yīng)，并通過酶催化底物發(fā)生化學變化將抗原抗體反應(yīng)通過顏色的方法顯現(xiàn)出來。
首要進程分為如下5個部分：
（1）將抗原抗體反應(yīng)固相化：即試驗中的包被環(huán)節(jié)，使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結(jié)構(gòu)，堅持其生物學特性和免疫學活性；
（2）封閉：固相吸附蛋白對錯特異性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面依然有吸附其它蛋白的才干，為了確保抗原抗體反應(yīng)的特異性，因此，包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無關(guān)蛋白封閉。一般以為牛血清白蛋白是zui為志向的封閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
（3）抗原抗體反應(yīng)：抗原或抗體在恰當?shù)慕橘|(zhì)下可進行特異的抗原抗體反應(yīng)。
（4）酶反應(yīng)：酶可以通過共價鍵與抗原或抗體銜接構(gòu)成結(jié)合物，當抗原抗體反應(yīng)的時分，被檢測靶政策中也結(jié)合了酶分子。
（5）底物反應(yīng)：結(jié)合在抗原抗體中的酶分子，可以促進底物發(fā)生顏色反應(yīng)，檢測人員可以裸眼查詢，可以通過顏色來斷定是否有免疫反應(yīng)的存在，通過顏色的深淺判別標本中相應(yīng)抗原或抗體的含量，也可借用酶標儀在恰當?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。